凍結処理により絹フィブロインに固定化されたカタラーゼの熱安定性 試験方法

　凍結処理により絹フィブロインがβ型に結晶化する特性を利用してカタラーゼを包括固定し、固定化により熱安定性が向上することがわかりました。

（１）絹フィブロイン水溶液の調製

　　絹繊維２０ｇを４０℃の９M臭化リチウム水溶液１００ｍｌで溶解します。溶解液をセルロースチューブに入れ透析し、臭化リチウムを脱塩し、６％の絹フィブロイン水溶液を得ました。

（２）酵素固定

　　６％絹フィブロイン水溶液と０．２ｇ／Lカタラーゼ水溶液を１対１の割合で混合し、この混合水溶液を－５℃で凍結し、凍結状態を数日間維持しました。次に、流水で解凍し、絹フィブロインの凝固物に包括固定されたカタラーゼを得、これを水溶液中で保存しました。

（３）酵素活性測定

　　ｐH７．２の０．１Mりん酸ナトリウム緩衝液２０ｍｌに５０ｍｇ／Lカタラーゼ水溶液１ｍｌあるいは絹フィブロインに固定化されたカタラーゼ０．０３ｇを加え、２５℃～６０℃の各温度で２０分間保持した後、２５℃で１０分間放置後、１００ｍM過酸化水素水溶液２０ｍｌを加え、２０分間反応させました。反応後、反応液を２ｍｌ採取し、６N硫酸５ｍｌと０．１M塩化マンガン水溶液２滴を加え、Ｎ／１００過マンガン酸カリウム水溶液で滴定し、反応液中に残存している過酸化水素量を求めました。